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        Western Blot技术
            发布时间: 2018-04-16 17:51    

        一、服务介绍

        免疫印迹(immunoblotting)又(you)称(cheng)蛋(dan)白(bai)质印迹(western blot),它(ta)是根据抗原抗体(ti)的(de)特(te)异性结合(he)检(jian)测(ce)复(fu)杂样品中的(de)某种(zhong)蛋白的方法(fa)。Western blot是在凝胶(jiao)电(dian)泳(yong)和固(gu)相免(mian)疫测定技术基(ji)础(chu)上发(fa)展起来(lai)的(de)一种新的(de)免疫(yi)生化(hua)技术。由于免疫印迹(western blot)具有SDS-PAGE的高分(fen)辨力和(he)固(gu)相免(mian)疫(yi)测定的高(gao)特异性(xing)和(he)敏(min)感性,现已成(cheng)为蛋(dan)白分析(xi)的(de)一(yi)种常(chang)规技(ji)术。免疫印迹(western blot)常用于鉴(jian)定(ding)某种蛋(dan)白,并能对(dui)蛋(dan)白进行定性(xing)和(he)半(ban)定量分(fen)析。本(ben)公司可(ke)以(yi)为您(nin)提(ti)供全(quan)套(tao)免(mian)疫印(yin)迹(ji)(western blot)技术服务。

         

        二、客户提供

        1.客户(hu)须在实(shi)验开始(shi)前(qian)确(que)保其细胞(bao)或(huo)组织中(zhong)有(you)目的(de)蛋(dan)白的表(biao)达,并(bing)提(ti)供目(mu)的(de)蛋(dan)白的(de)相(xiang)关(guan)信(xin)息(蛋白名称、大小等信息),尽(jin)可(ke)能(neng)详(xiang)细(xi)的背景资(zi)料(liao),包括蛋白的种属(shu)、大小、参考文献等。

        2.客户应对所(suo)提供(gong)的材料及信息负责(ze),如(ru)因客(ke)户提(ti)供的(de)材料及信(xin)息不(bu)准(zhun)确(que)而引(yin)起(qi)的(de)实验延(yan)误(wu)或(huo)经(jing)济损失由客(ke)户(hu)承担

        3.新鲜样品(组织为100-150 mg/样,细胞>107 个/样),若为冻存样品,请于-70 ℃以(yi)下保(bao)存(cun)并自(zi)备液(ye)氮(dan)以(yi)便运输。一抗,标明来(lai)源(yuan)和稀释度,也可让我司代(dai)买(mai)。

        4.WB所需(xu)要的(de)目的(de)蛋(dan)白(bai)的(de)一抗,可自行提供,或在(zai)本公(gong)司(si)购(gou)买(mai)相(xiang)应指标

         

        三、交付内容

          1. 权(quan)威完整的(de)实(shi)验报(bao)告(gao);

          2. 真(zhen)实的(de)原(yuan)始(shi)实验(yan)数据;

          3. 详(xiang)细(xi)的实验(yan)步(bu)骤(zhou)。

         

        四、服务流程

        1.蛋白质抽提;

        2.蛋白质定量:按BCA蛋(dan)白(bai)质定量(liang)试剂盒操(cao)作说(shuo)明完(wan)成;

        3.变(bian)性聚(ju)丙烯(xi)酰胺(an)不连(lian)续(xu)凝(ning)胶电(dian)泳(yong)(SDS-PAGE):将准(zhun)备(bei)好(hao)的样(yang)品(pin)液(ye)和大(da)小marker分别上样,标准(zhun)加(jia)进第一个孔(kong)中,电泳分离蛋白;

        4.蛋白质转移到PVDF膜,按Bio-Rad蛋白(bai)转移装(zhuang)置说(shuo)明(ming)组装(zhuang)滤(lv)纸凝胶纤(xian)维(wei)素夹(jia)层(ceng),120 V恒压转移1~2小时;

        5.Western blot膜(mo)的(de)封(feng)闭(bi)和(he)抗(kang)体(ti)孵育:PVDF膜在5%脱脂(zhi)奶粉溶液(ye)中(zhong)室温(wen)孵育1小(xiao)时以(yi)封(feng)闭膜上(shang)的非特(te)异(yi)结(jie)合,然后(hou)将封(feng)闭过的膜加入一(yi)抗(kang)室(shi)温孵(fu)育1.5小时,抗原抗体结合。再加入HRP标(biao)记(ji)的二(er)抗(kang)以(yi)结合(he)一(yi)抗,室温孵育膜1小时;

        6.Western blot结果检测:化(hua)学发光(guang)法(fa)检测,膜(mo)与化(hua)学发光底物孵育,经X胶片曝光显影。图片(pian)扫描(miao)保(bao)存为(wei)电(dian)脑(nao)文(wen)件(jian),并用Image J分析软件将(jiang)图片上(shang)每(mei)个(ge)特异(yi)条(tiao)带(dai)灰度(du)值的(de)数(shu)字化(hua);

              7.westernblot数据分析:目(mu)的蛋白的灰(hui)度(du)值除(chu)以(yi)内(nei)参(can)的灰(hui)度(du)值以校正误(wu)差(cha),所得结果代表(biao)某(mou)样品(pin)的(de)目(mu)的蛋白相(xiang)对(dui)含(han)量(liang);

        8.提供实验报告,包(bao)括详细的实验方(fang)法及免(mian)疫印迹(ji)实(shi)验(yan)结果(guo)的相关数据(ju)。

         

        五、实验结果展示:


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