永利网站游戏_厦门基科生物科技有限公司

     
    181-5037-7590


    customer_service@rifkadejavu.com
    您好,欢迎到永利网站游戏-分子生物学(xue)服务(wu)中(zhong)心

    Western Blot技术
        发布时间: 2018-04-16 17:51    

    一、服务介绍

    免疫印迹(immunoblotting)又称(cheng)蛋(dan)白(bai)质(zhi)印迹(ji)(western blot),它(ta)是(shi)根(gen)据抗原抗体的特异性结合(he)检(jian)测(ce)复杂样品中(zhong)的某(mou)种(zhong)蛋白的(de)方法(fa)。Western blot是(shi)在凝胶电(dian)泳和固相(xiang)免(mian)疫测定(ding)技(ji)术基(ji)础上(shang)发展(zhan)起来(lai)的一(yi)种新(xin)的免疫生(sheng)化技(ji)术(shu)。由于免疫印迹(western blot)具有SDS-PAGE的(de)高分辨力(li)和(he)固相免疫测定(ding)的高(gao)特(te)异性和敏感(gan)性(xing),现已(yi)成为蛋白(bai)分析的(de)一(yi)种常(chang)规技术(shu)。免疫印迹(western blot)常(chang)用于(yu)鉴(jian)定某种(zhong)蛋白,并(bing)能对蛋(dan)白(bai)进(jin)行(xing)定性(xing)和(he)半(ban)定(ding)量(liang)分(fen)析。本公司可以(yi)为(wei)您(nin)提供(gong)全(quan)套免(mian)疫印(yin)迹(western blot)技术服务。

     

    二、客户提供

    1.客户(hu)须(xu)在(zai)实验(yan)开(kai)始前(qian)确(que)保(bao)其(qi)细(xi)胞(bao)或组(zu)织中(zhong)有目的蛋(dan)白的(de)表(biao)达,并提(ti)供目的(de)蛋(dan)白(bai)的(de)相(xiang)关信息(蛋白名称、大小等信息),尽可能(neng)详细(xi)的背(bei)景(jing)资料(liao),包(bao)括(kuo)蛋白的(de)种属(shu)、大小、参考文献等。

    2.客户应对(dui)所(suo)提供(gong)的材料及信(xin)息负责(ze),如(ru)因客户提(ti)供(gong)的材料(liao)及(ji)信息不(bu)准(zhun)确(que)而(er)引起的(de)实验(yan)延误(wu)或经济(ji)损失由客(ke)户(hu)承担

    3.新鲜样品(组织为100-150 mg/样,细胞>107 个/样),若为冻存样品,请于-70 ℃以(yi)下保(bao)存(cun)并自备(bei)液(ye)氮以便(bian)运(yun)输(shu)。一抗,标明来(lai)源(yuan)和稀(xi)释度(du),也(ye)可(ke)让(rang)我司(si)代买(mai)。

    4.WB所(suo)需要的(de)目的(de)蛋白(bai)的一抗(kang),可自行提供,或在本公司(si)购买相(xiang)应指(zhi)标

     

    三、交付内容

      1. 权(quan)威完整的实验报(bao)告;

      2. 真(zhen)实(shi)的原始实验(yan)数据;

      3. 详(xiang)细(xi)的(de)实验(yan)步骤。

     

    四、服务流程

    1.蛋白质抽提;

    2.蛋白质定量:按BCA蛋白(bai)质(zhi)定(ding)量试剂盒(he)操作(zuo)说明(ming)完(wan)成(cheng);

    3.变性聚丙烯(xi)酰()胺(an)不连(lian)续凝胶(jiao)电(dian)泳(SDS-PAGE):将(jiang)准备(bei)好(hao)的(de)样(yang)品(pin)液和大(da)小(xiao)marker分别上样,标准(zhun)加(jia)进第一个(ge)孔(kong)中(zhong),电泳分离蛋白;

    4.蛋白质转移到PVDF膜,按Bio-Rad蛋白转(zhuan)移(yi)装(zhuang)置(zhi)说(shuo)明(ming)组装(zhuang)滤纸(zhi)凝(ning)胶纤(xian)维(wei)素(su)夹层(ceng),120 V恒压转移1~2小时;

    5.Western blot膜(mo)的封闭和(he)抗体(ti)孵育(yu):PVDF膜在5%脱脂(zhi)奶粉溶液中(zhong)室温(wen)孵(fu)育(yu)1小(xiao)时(shi)以封闭(bi)膜上(shang)的非特异结合,然(ran)后将(jiang)封(feng)闭(bi)过(guo)的膜加(jia)入(ru)一抗室(shi)温孵育(yu)1.5小时,抗原抗体结合。再加入HRP标记的二抗(kang)以(yi)结(jie)合一(yi)抗,室温孵育膜1小时;

    6.Western blot结果检测:化学(xue)发(fa)光法(fa)检测(ce),膜与化(hua)学发(fa)光(guang)底物(wu)孵育(yu),经X胶片曝光显影。图片扫描(miao)保(bao)存(cun)为电(dian)脑文(wen)件(jian),并用Image J分析软件(jian)将(jiang)图(tu)片(pian)上(shang)每个特(te)异条(tiao)带灰(hui)度(du)值(zhi)的数(shu)字(zi)化(hua);

          7.westernblot数据分析:目(mu)的(de)蛋(dan)白(bai)的灰度(du)值(zhi)除以内参的灰(hui)度值以(yi)校(xiao)正误(wu)差(cha),所得(de)结果代表(biao)某(mou)样(yang)品的(de)目(mu)的蛋(dan)白相(xiang)对(dui)含量;

    8.提供实验报告,包(bao)括详细的(de)实验方(fang)法(fa)及免疫印迹(ji)实验结(jie)果的(de)相(xiang)关数据。

     

    五、实验结果展示:


    181-5037-7590
    联系电话

    公司邮箱:customer_service

    @rifkadejavu.com?

    Service center
    技术服务中心