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      Western Blot技术
          发布时间: 2018-04-16 17:51    

      一、服务介绍

      免疫印迹(immunoblotting)又(you)称蛋白(bai)质印(yin)迹(ji)(western blot),它是根(gen)据抗(kang)原抗体(ti)的特异(yi)性结合(he)检(jian)测(ce)复(fu)杂(za)样品中(zhong)的(de)某(mou)种蛋(dan)白的(de)方法(fa)。Western blot是在(zai)凝(ning)胶电(dian)泳和(he)固(gu)相免疫(yi)测(ce)定技(ji)术基(ji)础(chu)上(shang)发(fa)展起来(lai)的一种新(xin)的(de)免疫生(sheng)化(hua)技术。由于免疫印迹(western blot)具有SDS-PAGE的(de)高(gao)分(fen)辨(bian)力和固(gu)相(xiang)免疫测定的高特(te)异性(xing)和(he)敏感性(xing),现已(yi)成为(wei)蛋白分(fen)析的(de)一(yi)种(zhong)常规(gui)技术(shu)。免疫印迹(western blot)常(chang)用于(yu)鉴(jian)定(ding)某(mou)种(zhong)蛋白(bai),并(bing)能对(dui)蛋白进(jin)行定(ding)性(xing)和(he)半(ban)定(ding)量分析。本(ben)公(gong)司可以为(wei)您提供(gong)全(quan)套免(mian)疫(yi)印迹(ji)(western blot)技术服务。

       

      二、客户提供

      1.客(ke)户(hu)须(xu)在实验开始前(qian)确保其细胞或组织中有目(mu)的(de)蛋(dan)白(bai)的表(biao)达(da),并提供(gong)目(mu)的(de)蛋(dan)白的(de)相关(guan)信(xin)息(xi)(蛋白名称、大小等信息),尽(jin)可能(neng)详细(xi)的(de)背(bei)景资料(liao),包(bao)括蛋(dan)白的种(zhong)属、大小、参考文献等。

      2.客户(hu)应(ying)对所(suo)提供的材(cai)料(liao)及信息(xi)负(fu)责,如因客户(hu)提供(gong)的材料(liao)及(ji)信(xin)息(xi)不准(zhun)确而引起的实(shi)验(yan)延误(wu)或(huo)经(jing)济(ji)损失(shi)由客(ke)户承担

      3.新鲜样品(组织为100-150 mg/样,细胞>107 个/样),若为冻存样品,请于-70 ℃以下保存并(bing)自备液氮以(yi)便运(yun)输。一抗,标(biao)明(ming)来源和稀(xi)释度,也(ye)可让我(wo)司代买。

      4.WB所需(xu)要(yao)的(de)目的(de)蛋(dan)白(bai)的一(yi)抗(kang),可自行提供,或在(zai)本公司(si)购买相(xiang)应指(zhi)标(biao)

       

      三、交付内容

        1. 权(quan)威完整的实(shi)验报(bao)告;

        2. 真(zhen)实的(de)原始(shi)实验(yan)数据(ju);

        3. 详(xiang)细的(de)实验(yan)步骤。

       

      四、服务流程

      1.蛋白质抽提;

      2.蛋白质定量:按BCA蛋(dan)白质(zhi)定量(liang)试(shi)剂盒(he)操(cao)作说明完(wan)成(cheng);

      3.变性聚丙(bing)烯酰()胺不连(lian)续(xu)凝(ning)胶(jiao)电(dian)泳(SDS-PAGE):将准备好的样品(pin)液和(he)大小marker分别上样,标准(zhun)加进(jin)第一个(ge)孔中,电泳分离蛋白;

      4.蛋白质转移到PVDF膜,按Bio-Rad蛋(dan)白转(zhuan)移装(zhuang)置(zhi)说明组装(zhuang)滤(lv)纸(zhi)凝(ning)胶(jiao)纤维素(su)夹层(ceng),120 V恒压转移1~2小时;

      5.Western blot膜的封闭(bi)和(he)抗(kang)体孵(fu)育(yu):PVDF膜在5%脱(tuo)脂奶(nai)粉(fen)溶(rong)液(ye)中(zhong)室温孵(fu)育(yu)1小(xiao)时(shi)以封(feng)闭(bi)膜(mo)上(shang)的非(fei)特(te)异(yi)结(jie)合,然(ran)后将封(feng)闭过(guo)的膜加入一抗(kang)室温孵(fu)育1.5小时,抗原抗体结合。再加入HRP标记(ji)的二(er)抗(kang)以(yi)结(jie)合一抗(kang),室温孵育膜1小时;

      6.Western blot结果检测:化(hua)学发(fa)光(guang)法检(jian)测,膜与化(hua)学发光(guang)底物(wu)孵育,经X胶片曝光显影。图(tu)片扫描(miao)保存(cun)为(wei)电脑文件(jian),并用Image J分(fen)析(xi)软(ruan)件(jian)将图片上每(mei)个(ge)特(te)异(yi)条带灰度值(zhi)的(de)数字(zi)化(hua);

            7.westernblot数据分析:目(mu)的蛋(dan)白(bai)的(de)灰度值除(chu)以内(nei)参(can)的(de)灰(hui)度(du)值(zhi)以校正(zheng)误(wu)差,所(suo)得(de)结果代(dai)表(biao)某(mou)样(yang)品(pin)的目的蛋白相(xiang)对含量;

      8.提供实验报告,包括(kuo)详细的实(shi)验方法(fa)及免(mian)疫印迹(ji)实(shi)验(yan)结(jie)果(guo)的相(xiang)关数据。

       

      五、实验结果展示:


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